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实验方法:移液器的原理及使用方法

发布时间:2021-03-27 11:58:17

99%的研究者都不知道该如何正确地使用移液器!移液器的工作原理是怎样的呢?应该如何校准?做实验时如何可以提高实验结果的精准度呢?这篇文章将系统地给出答案。


移液术语

  • 分配:移液样品。

  • 调整:调整移液器,使分配的容积在规格范围内。

  • 吸入:吸入样本。

  • 吹出:完全清空枪头(tips)。

  • 校准检查:检查实际分配容积与理论分配容积之间的差值。

  • 空气置换移液器:用于水溶性溶液。通过空气置换移液器中、活塞和液体之间仍保留着一定量的空气。

  • 正位移移液器:用于高粘度和挥发性液体。在正位移液器中,活塞与液体直接接触。

移液枪头.jpg

空气位移移液管如何工作?

  • 设置容积时,活塞将移动到适当的位置。

  • 当操作按钮按下第一档时,活塞会排出音量设置上指示的相同空气量。

  • 将尖端浸入液体后,操作按钮被释放。这会产生部分真空,并吸入指定体积的液体进入尖端。

  • 当操作按钮再次按下第一档时,进入枪头尖端的液体不会完全吹出。要完全清空尖端,需要将按钮将按下到第二档。

影响空气置换移液器精度的因素:

温度:移液精度最重要的因素是液体温度。下图显示了液体温度与移液器和空气不同的时体积的变化。如果液体、移液器和空气的温度相同,则精度不会受到显著影响。

密度:密度是液体的质量/体积比。密度根据温度和气压而变化。通常,水的密度为0.996千克/dm3,乙醇为0.79千克/dm3,硫酸(H2SO4)为1.85千克/dm3。

高度:地理高度通过气压影响精度。高海拔时气压降低,转换系数Z降低。一些液体的沸点也可以变化到非常接近室温,急剧增加蒸发损失。

移液枪.jpg

正位移移液器

正位移移液器常用于PCR和其他DNA扩增技术等应用。正位移液器中使用的微注射器尖端是一次性的。这有助于避免样品对样品的交叉污染,以及气溶胶效应造成的污染。

正位移移液器如何工作?

  • 设置容积时,活塞将移动到适当的位置。

  • 当操作按钮按下停止时,活塞下降到枪头开口。

  • 将枪头尖端浸入液体中后,释放操作按钮。然后升起柱塞并创建部分真空。这会导致液体进入枪头。

  • 再次按下操作按钮时,活塞下降,将液体从枪头排出。

操作者.jpg

移液使用的一般原则

  • 在工作日开始时检查移液器,有无灰尘和污垢在外。如果需要,用70%乙醇擦拭。

  • 将容积设置为移液器指定的范围内。

  • 握住移液器,让"紧握手指休息"放在食指上。

  • 为了最大限度地提高精度,移液器、尖端和液体应处于相同的温度。

  • 为确保准确性,仅使用由无污染聚丙烯制成的高质量枪头。

  • 高质量枪头专为一次使用而设计,不应对它们进行清洁以重复使用,因为它们的计量特征将不再可靠。

  • 预冲洗(1-3次)可以提高移液的准确性,尤其是当使用正位移移液器时。

  • 当枪头有液体时,避免将移液器倒置。液体可能会进入移液器的内部,污染移液器。

  • 使用尖端弹出器和手套避免手指受到污染。

  • 不使用时,将移液器存放在直立位置,如挂在移液器支架上。

  • 根据使用频率和应用,定期检查校准,但每年至少检查一次。如果每天使用,建议间隔三个月检查一次。具体操作请按照制造商说明手册中的重新校准说明进行操作。

  • 移液器校准.jpg

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